Para el diseño de la Ruta del Duero se ha tomado como referencia el recorrido del río, que atraviesa las provincias de Soria, Burgos, Valladolid, Zamora y Salamanca. Comienza en Duruelo de la Sierra (Soria), donde nace el Duero, y acaba en el muelle fluvial de Vega de Terrón (Salamanca), donde el río cruza la frontera y se adentra en Portugal. La Ruta pasa por enclaves monumentales e históricos, recorre los viñedos de Ribera del Duero, Toro y Arribes del Duero, el Parque Natural de los Arribes y la Reserva Natural Riberas de Castronuño-Vega del Duero. La ruta recorre 727 kilómetros de Este a Oeste de Castilla y León, con un total de 2.065 señales instaladas a lo largo de las cinco provincias, cruzando 84 municipios y con un total de 294 Bienes de Interés Cultural en el trazado. En Zamora entra por el Este y comparte trazado con la ruta Eurovelo hasta la capital, desde donde se dirige al Oeste camino de Los Arribes.
